频年来肿瘤诊治规模发展马上,而肿瘤疫苗是现在肿瘤诊治的灵验纪律之一,其由肿瘤干系抗原(tumor-associated antigens,TAAs)、肿瘤多肽或肿瘤细胞裂解家具等制备而成,通过退换机体先天或取得性免疫反应,改善T细胞的增殖、活化和功能,促进细胞因子的开释,改善肿瘤微环境,促进T细胞对肿瘤细胞的识别、杀伤,扼制肿瘤 细胞的增殖,已毕对肿瘤的 防患及诊治。而肿瘤外泌体疫苗(exosomes vaccine,EV)是肿瘤疫苗的紧迫类型之一,跟着肿瘤外泌体疫苗商议的深刻,有越来越多的笔据标明其私有的上风。

1 外泌体的生物学特质

1.1 外泌体结构/功能

外泌体(exosomes,EX)是细胞开头的纳米级(直径30～140 nm)细胞外囊泡,具有脂质双分子层,存在于血液、尿液、乳汁、呼吸谈分泌物、唾液以及细胞培养基等果然统共的生物体液中。EX含有与细胞特异性功颖悟系的膜卵白和可溶性因子,如脂质、卵白质和核酸。商议证明EX通过不同的机制参与了常常生理和病理生理的紧迫经由,不错远距离地将信息从宿主细胞传递到靶细胞,包括抗原呈递、病原体免疫监视、细胞间信号传导、卵白质和RNA的替代分泌以及感染因子传递。由于EX存在于生物体液中,其开头依赖的含量不错密切反应多样生理和病理情况,可看成诊断和监测诊治决议疗效的理念念无创或微创纪律。

1.2 肿瘤细胞外泌体功能

肿瘤细胞干系的EX不错退换癌症的发展。肿瘤源性外泌体(tumor-derived exosome,TEX)佩戴肿瘤干系抗原或肿瘤特异性抗原,并具有免疫原性,通过将肿瘤抗原转机到树突状细胞(dendritic cells,DC)等抗原呈递细胞(antigen-presenting cells,APC)中指导抗肿瘤免疫,同期肿瘤源性外泌体也可能促上皮间充质滚动,外泌体中包含低氧指导因子1α(HIF1α)、β-catenin、caveolin-1和滚动滋长因子β(TGF-β),增强了肿瘤细胞的迁徙智商和侵袭智商。因此,肿瘤细胞外泌体也有助于转机前微环境及基质重塑。

EX为非细胞抗原,它不错抒发其发源细胞的特定分子,具有与发源细胞磋议的特质,看成内源性自然给药系统具有私有的上风,包括:

(1)外泌体中的脂质/卵白质增强了穿透生物膜的智商,提升给药效用;

(2)外泌体的纳米级结构概况灵验地拼装抗原并被DC细胞吞吃;

(3)外泌体具有先天的组织相容性生物毒性小,可更灵验的浓缩特异性抗原。恰是外泌体的特殊功能,细胞开头的外泌体已成为疫苗商议规模新的疫苗寄递平台。

2 奈何提升外泌体数目

商议骄贵,根据高超本质室模范,不错大限度取得来自肿瘤细胞的细胞外囊泡,且具有临床使用所需的质料,然而仍无法取得充足的细胞外囊泡数目。EX看成细胞外囊泡的一种,也只须有限数目的EX不错从肿瘤积液或细胞培养基中取得。在最近的商议中,为应答不同的应激源刺激,细胞不错通过增多细胞外囊泡的开释来退换,如缺氧、酸中毒、发射线、细胞毒性药物、氧化应激和热应激这些应激源在数目和/或含量(质料)上退换细胞外囊泡的分泌。在肿瘤细胞外泌体商议中常用的主要为细胞毒药物和发射线。

LYU等商议中发现裸露在多种细胞毒性药物(紫杉醇、依托泊苷、卡铂、盐酸伊立替康)中的耐药或敏锐的HepG2细胞产生了应激作用,肿瘤外泌体被肝癌细胞积极开释,同期促进热休克卵白(heat shock proteins,HSP)抒发和当然杀伤细胞(natural killer cell,NK)活性增强。BANDARI等[35]商议骄贵当骨髓瘤细胞裸露于常用的抗骨髓瘤药物硼替佐米、卡非佐米或好意思法兰时,细胞的EX分泌显贵增强,与未裸露于药物的细胞比较,其外泌体卵白质组谱抒发调动,重塑细胞外基质并调动肿瘤和宿主细胞活动。COCOZZA等在商议中解释,在体外T细胞淋巴瘤小鼠模子中,亚致死量的环磷酰胺使细胞产生应激,增多外泌体的分泌产量(61%±16%)。由这种纪律取得的外泌体保留了其抗原性,在体内指导的免疫反应与辐照肿瘤细胞或肿瘤裂解物引起的免疫反应异常,何况具有无细胞抗原的特殊上风。

KIM等在商议中发现伽马辐射不错为野心和开发灵验的外泌体疫苗提供紧迫痕迹,这些疫苗不错指导强免疫原性,异常是肿瘤特异性多功能T细胞反应。G-Exo刺激DC疫苗比N-Exo刺激DC疫 苗具有更强的肿瘤细胞滋长扼制作用,并伴跟着更多的肿瘤特异性多功能效应T细胞。 WYSOCZYNSKI等[28]不雅察到,东谈主和小鼠肺癌细胞系在非凋一火强度下的缺氧和发射剂量照耀下分泌更多的细胞外囊泡(extracellular vesicles,EV)。这些肿瘤开头的EV激活并诱惑基质成纤维细胞和内皮细胞。指导基质细胞中IL-8、VEGF、LIF、OSM、IL-11和MMP-9等促血管生成因子的抒发,增强了东谈主和小鼠肺癌细胞在体内的转机后劲。在玄色素瘤的商议中,有东谈主发现玄色素瘤细胞裸露于伽马辐射导致产生特异的外泌体,从而引刺激的DC细胞启动CD8+T细胞的增殖和肿瘤特异性反应,扼制肿瘤细胞滋长。

在动物肿瘤内打针制备的伽马辐射导致产生特异的外泌体制剂可通过宿主NK细胞介导的IFN-γ过量产生来阻遏玄色素瘤的肿瘤进展。YANG等在商议热应激对阿霉素惩办的MCF-7肿瘤细胞外泌体的影响时发现,不异数目MCF-7细胞的Exo-Dox-hs含量高于Exo-Dox,何况Exo-Dox-hs中阿霉素的含量高于磋议数目MCF-7细胞的Exo-Dox。Exo-Dox和Exo-Dox-hs显贵扼制MCF-7细胞增殖,指导MCF-7细胞凋一火,可扼制小鼠乳腺肿瘤细胞的滋长。

3 根据开头细胞不同的外泌体疫苗分类

诓骗外泌体看成肿瘤疫苗一直是肿瘤免疫学规模浩荡商议的主题之一按照开头细胞不同,主要分为:

(1)开头于肿瘤细胞的外泌体;

(2)开头于树突状细胞等免疫细胞的外泌体;

(3)开头于干细胞的外泌体;

(4)其他细胞开头的外泌体。

与使用肿瘤细胞或肿瘤细胞裂解物比较,使用外泌体看成肿瘤抗原开发肿瘤疫苗具有较多的上风。

3.1 肿瘤细胞开头的外泌体疫苗

肿瘤细胞开头的外泌体包含无数的肿瘤干系性抗原及肿瘤特异性抗原,包括一些卵白质,如主要组织相容性复合物Ⅰ类和Ⅱ类(major histocompatibility complex-Ⅰ,MHC-Ⅰ和major histocompatibility complex-Ⅱ,MHC-Ⅱ)、磷脂酰丝氨酸、乳脂球卵白8、脂体干系膜卵白1、膜联卵白Ⅱ、CD9、CD81、CD54和CD63等,这些卵白质组促进EX勾搭并被DC细胞上的干系配体领受,将平凡的肿瘤抗原转机到DC细胞,进一步启动肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic lymphocyte,CTL)并指导灵验的抗肿瘤免疫[50],同期为了克服外泌体自身的免疫扼制作用,对肿瘤细胞进行基因修饰,产生具有高抒发抗原或激活因子的外泌体,可能概况进一步改善其对免疫细胞的激活作用,改善肿瘤微环境,指导抗肿瘤细胞免疫反应,扼制肿瘤细胞的滋长、复发及转机等。

HUANG等在商议中发现慢病毒介导的PD-L1 shRNA告捷下调了亲本白血病细胞偏激外泌体(LEX)中PD-L1的抒发。与亲本细胞LEX比较,LEXPD-L1si指导了更好的DC熟谙,增强了T细胞的活化,指导更多的T细胞增殖和Th1细胞因子开释。用LEXPD-L1si接种可显着扼制肿瘤细胞滋长,延长免疫小鼠的生活期。TAGHIKHANI等[52]使用TEXs看成肿瘤抗原源,并通过Let-7i、miR-142和miR-155的加入对其进行工程化更正,通过多种不同的机制增强DC熟谙来指导相宜的免疫反应。LEE等用Ⅱ类反激活因子(class Ⅱ transactivator,CIITA)基因转导玄色素瘤细胞系B16F1,增多了开释的外泌体中MHC-Ⅱ类和TRP2抗原的抒发,从而指导了更多Th1和TRP2特异性的细胞毒性T细胞反应。

YILDIRIM等通过两种强效佐剂CpGODN和p(I:C)加载修饰4T1/her2细胞开头的外泌体。修饰的外泌体同期包封CpGODN和p(I:C),通过激活抗原特异性原代和回想性T细胞反应骄贵出免疫刺激特质。该外泌体的佐剂疫苗通过提升IgG2a抗体和IFN-γ的分泌来刺激广大的Th1型免疫反应,导致4T1肿瘤小鼠的肿瘤消退。TLR佐剂如CpGODN和p(I:C)在载体系统中蚁合使用时,比单独使用TLR佐剂更显着地触发协同免疫反应,显贵增多了CD4+和CD8+T细胞反应以及抗原特异性抗体的产生。HU等发现肿瘤干系成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)是TME中最丰富的基质细胞,并开发了FAP基因工程肿瘤细胞开头的外泌体样纳米囊泡(eNVs-FAP),其是可同期靶向肿瘤内容和间质的疫苗。在结肠癌、玄色素瘤、肺癌和乳腺癌模子中,eNVs-FAP疫苗通过指导针对肿瘤细胞和FAP+CAFs的强而特异性的细胞毒性T淋巴细胞免疫应答和重编程免疫扼制TME,从而扼制肿瘤细胞滋长,激活的细胞免疫反应不错通过从CTL开释IFN-γ和耗尽FAP+CAFs来促进肿瘤铁凋一火。

3.2 免疫细胞开头的外泌体疫苗

3.2.1 树突状细胞开头的外泌体疫苗

DC细胞外泌体(dendritic cell-derived exosome,DEX)包含统共DC细胞必要的免疫刺激元素,如MHC-Ⅰ和MHC-Ⅱ复合物,高水平的共刺激分子等可看成无细胞替代,克服DC细胞为基础的诊治的局限性,如资本高、耗时长、活细胞不易保存等。领先,安稳的外泌体膜使Exo更安妥制造和储存。其次,Exo看成最小的抗原呈递单元不受环境影响,不错保合手功能和表型。终末,无细胞疫苗裁汰了与活的DC干系的病毒感染和体内复制的风险。

有商议标明,抒发AFP基因的小鼠DC细胞分泌的外泌体,在异位和原位肝癌小鼠中,异常是在二乙基亚硝胺(DENA)指导的原位肝癌小鼠中,肝癌小鼠的肿瘤微环境得到改善,肿瘤免疫微环境由免疫扼制型重塑为免疫刺激型,肿瘤微环境中CD8+T细胞增多、IFN-γ和IL-2水平上涨,CD25+Foxp3+退换性T(Treg)细胞减少、 IL-10和TGF-β水平下落,不错指导热烈的抗原特异性免疫反应并阐发扼制肿瘤作用。LI等[60]诓骗包含患者特异性新抗原的树突状细胞养殖的外泌体为载体,制备成新抗原外泌体疫苗,激勉灵验的抗原特异性广谱T细胞和B细胞介导的免疫反应,具有很高的生物安全性和生物相容性。在B16F10、MC-38荷瘤动物中,新抗原外泌体纳米疫苗的寄递鉴识显贵扼制肿瘤细胞滋长、延永生活期、蔓延肿瘤发生并具有恒久回想,扼制肺转机。

3.2.2 巨噬细胞开头的外泌体疫苗

外泌体富含来自亲本细胞的RNA和卵白质,因此炎性免疫细胞分泌的外泌体可用于增强疫苗的免疫反应。活化巨噬细胞分泌的外泌体,既在先天免疫中起着关节作用,也不错启动顺应性免疫反应。巨噬细胞对不同环境的刺激阐发出不同的表型,因此一般被分为M1和M2细胞亚群。经典活化的巨噬细胞产生炎性细胞因子来排除感染性微生物并促进Th1免疫反应。除了细胞因子和趋化因子外,巨噬细胞还不错分泌其他影响局部微环境免疫退换的生物活性因子,如外泌体。M1巨噬细胞开头的外泌体分泌炎性信号并开导局部免疫刺激微环境,因此其具有可能看成免疫佐剂增强疫苗的作用。

CHENG等商议了来自M1极化的炎性巨噬细胞的外泌体看成癌症疫苗免疫增强剂的可能性。皮下打针后,M1巨噬细胞的外泌体阐发出向淋捧场转移的趋势,主要被局部巨噬细胞和树突状细胞领受,并指导Th1细胞因子的开释。并发现M1巨噬细胞外泌体而非M2巨噬细胞外泌体增强了脂质磷酸钙(LCP)纳米颗粒包裹的TRP2疫苗的活性,并指导了更强的抗原特异性细胞毒性T细胞反应。在玄色素瘤的滋长扼制商议中,与LCP纳米颗粒疫苗共同使用时,证明了M1巨噬细胞外泌体是一种比CpG寡核苷酸更灵验的疫苗佐剂。

不异ZHAO等也发现访佛的M1巨噬细胞外泌体的肿瘤疫苗免疫佐剂的作用,他们发现来自M1巨噬细胞的EX将细胞分裂戒指卵白42(Cdc42)和CpG传递给左右的巨噬细胞,并通过正反馈进一步增强左右巨噬细胞的吞吃作用。通过巨噬细胞外泌体指导的Abs-CpG级联扩增,极地面改善了免疫原性和免疫扼制微环境,从而提升了肿瘤疫苗诊治的终端。

3.3 干细胞开头的外泌体疫苗

胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESCs)和肿瘤细胞具有共同的抗原,这些抗原被以为是“非自体”抗原,因为该类抗原一般在常常成东谈主组织中不抒发或低抒发。基于ESCs和恶性肿瘤细胞之间的抗原相似性,ESCs的外泌体与肿瘤细胞外泌体访佛,可激活抗肿瘤反应并指导肿瘤消退,具有成为肿瘤疫苗的后劲。

MENG等[65]在商议肿瘤疫苗时发现,接种ESCs-Exo/GM-CSF疫苗的小鼠不错扼制转机性肺肿瘤细胞的滋长。小鼠肺癌负荷从未接种疫苗的小鼠的1.86%裁汰到接种疫苗的小鼠的0.036%。ES-Exo/GM-CSF疫苗接种的终端与肿瘤浸润性免疫扼制细胞[包括T退换细胞、骨髓源性扼制细胞(MDSCs)和肿瘤干系巨噬细胞]的裁汰以及肿瘤内CD8+T细胞效应细胞因子产生的增多关联。WANG等[66]制备了指导多颖悟细胞(induced pluripotent stem cell,iPSC)养殖的外泌体,并将其与树突状细胞孵育,探索其在小鼠玄色素瘤模子中的抗肿瘤作用时,发现体外/体内iPSC外泌体(DC+Exo)刺激DC疫苗指导的抗肿瘤免疫应答。接种DC+Exo疫苗后,提真金不怕火的脾脏中的T细胞能灵验杀死多种体外肿瘤细胞、扼制玄色素瘤滋长、肺转机,同期DC+Exo疫苗可指导恒久T细胞反应并防备玄色素瘤的复发。何况生物相容性商议标明,DC疫苗莫得显贵调动常常细胞和小鼠内脏的活力,无显着不良反应。因此也解释了iPSC-Exos王人不错看成DC疫苗的强效佐剂,并指导广大的抗肿瘤免疫。

3.4 基因工程细胞开头的外泌体疫苗

乳头病毒是东谈主类肛门生殖器肿瘤的主要诱因之一,现在干系疫苗诊治是防患肿瘤发现的紧迫时期,DI BONITO等[67]在商议HPV-16病毒疫苗时,使用抒发Nefmut(一种外泌体锚定卵白)/E7会通卵白的DNA载体对小鼠进行肌肉疫苗免疫,在打针部位与肌肉细胞等统共细胞类型自愿开释的纳米囊泡勾搭,酿成内源性工程外泌体,指导针对HPV-16-E7肿瘤干系抗原的高效无穷制细胞毒性T淋巴细胞(CTL)免疫反应,起到抗肿瘤的诊治终端。

多种细胞外泌体会通阐发各安详抗肿瘤免疫经由中的上风亦然紧迫商议标的之一,XU等通过会通肿瘤源性外泌体(TEX)和树突状细胞膜囊泡(DCMV)开发了一种杂缴纳米疫苗(Hy-M-Exo)。该杂交疫苗既有DCMV淋巴归巢的关节卵白CCR7,骄贵出更高的淋巴靶向效用,同期保留的肿瘤抗原和内源性危急信号激勉了广大的T细胞应答。该纳米疫苗在头颈部肿瘤小鼠模子中骄贵出高超的诊治终端。

WANG等诓骗轮回癌细胞的“归巢”智商,制备了巨噬细胞-肿瘤杂交细胞。并将从肿瘤细胞均分离的细胞核导入活化的M1巨噬细胞中产生嵌合外泌体(aMT-Exos)。aMT-Exos概况在小鼠的淋捧场和多种不同肿瘤组织中积聚,并能以经典的抗原呈递细胞指导的免疫刺激神气和特定的“平直外泌体相互作用”神气参加淋捧场,并启动T细胞活化,起到扼制肿瘤作用。

4 外泌体疫苗蚁合其他诊治神气的商议

无论免疫细胞还是肿瘤细胞开头的外泌体王人能从亲本细胞领受肿瘤特异性抗原或抗原呈递的分子,具有广大的抗肿瘤免疫激活作用。因为外泌体疫苗的灵验性及安全性等,蚁合其他诊治神气是后续外泌体疫苗的紧迫商议标的,这些集诊断治的神气包括局部诊治、化疗、细胞因子、纪律性死亡1(programmed cell death protein 1,PD-1)单抗等。

ZHONG等在小鼠肝癌模子中使用DC开头的外泌体疫苗,蚁合微波消融诊治,不错显贵改善HCC小鼠的肿瘤免疫微环境,肿瘤部位的CD8+T细胞数目增多,Treg细胞数目减少。血浆IFN-γ浓度升高,血浆IL-10浓度裁汰,不错显贵减少肿瘤负荷,起到了和DC疫苗蚁合微波消融诊治一样的疗效,何况显贵好于单纯微波消融的疗效。

WANG等商议制备巨噬细胞-肿瘤杂交细胞产生嵌合外泌体(aMT-Exos)。其自身可产生扼制肿瘤作用,且与抗纪律性死亡1(a-PD-1)诊治蚁合使用时,aMT-Exos概况延长转机性和术后肿瘤复发小鼠模子的生活期,这种免疫应答和肿瘤微环境的协同激活使aMT-Exos概况灵验扼制原发肿瘤、肿瘤转机和术后肿瘤复发,从云尔毕个性化免疫诊治。

GUO等在商议淋巴细胞白血病时将树突状细的外泌体与环磷酰胺(CTX)和聚肌苷-多胞酸钠盐(Poly I:C)蚁合使用后,发现用L1210淋巴细胞白血病细胞抗原和脂多糖刺激树突状细胞,Poly I:C概况指导DC熟谙,后纯化树突状细胞分泌的外泌体。在体外刺激脾细胞增殖,增强脾细胞的细胞毒作用。在小鼠体内集诊断治不错扼制L1210细胞肿瘤滋长,并最大限制地延长荷瘤小鼠的生活时期。

XU等将肾癌细胞的外泌体(RDEs)分离,发现其可促进CD8+/CD4+T细胞百分比的增多,体外RDEs与GM-CSF和IL-12蚁合使用时更能刺激CD8+T细胞对肾癌细胞的细胞毒性。在小鼠模子中,RDEs免疫扼制了肾癌肿瘤细胞的滋长,并通过FasL/Fas信号通路刺激更强的特异性细胞毒性CD8+T细胞反应。这些发现标明,RDEs刺激的CD8+T细胞蚁合GM-CSF和IL-12比单独使用RDEs能更灵验地阐发更强的细胞毒作用。

5 肿瘤外泌体疫苗干系临床商议

勾搭临床前的商议,外泌体疫苗总体具有高超的安全性及灵验性,在临床商议中也进行了干系的探索。

SHI等商议了雾化的东谈主脂肪源性间充质基质细胞开头的细胞外囊泡(HAMSC-EV)在临床前肺挫伤模子中的生物漫衍和终端,并探讨了雾化的HAMSC-EV在健康志愿者中的安全性。统共24名志愿者对HAMSC-EV雾化耐受高超,从运行雾化到雾化后第7天未发生严重不良事件,标明雾化的HAMSC-EV可在肺挫伤疾病中临床应用,是一种很有远景的诊治计策。2005年ESCUDIER等进行了转机性玄色素瘤患者接种自体树突状细胞开头的外泌体(DEX)的第一项外泌体Ⅰ期考验,发现外周血中未检测到MAGE3特异性CD4+和CD8+T细胞反应,但有部分患者取得部分缓解,何况证明了外泌体给药的安全性。2009年DAI等进行了腹水源性外泌体(Aex)蚁合GM-CSF免疫诊治结直肠癌(CRC)的Ⅰ期临床考验。通过密度梯度超离心分离的Aex,含有外泌体和肿瘤干系癌胚抗原(CEA)的多种免疫退换记号物,该商议共纳入40例晚期结直肠癌患者,立地分为Aex单用组和Aex蚁合GM-CSF组,诊治后发现这两种疗法王人是安全且耐受性高超的,何况Aex蚁合GM-CSF较单独Aex不错指导更好的肿瘤特异性抗肿瘤细胞毒性T淋巴细胞反应,使结直肠癌患者取得更长的生活期,教导Aex蚁合GM-CSF免疫诊治结直肠癌是可行且安全的,是一种安全可行的晚期结直肠癌免疫诊治纪律。

为了取得更平凡和可合手续的临床反应,以激勉更强的抗癌免疫原性,有商议着眼于工程外泌体上。MICHAEL等将装载MAGE肿瘤抗原的自体树突状细胞开头的外泌体(DEX)看成肿瘤疫苗,在非小细胞肺癌(NSCLC)患者中进行了临床商议,共13例患者入组,9例完成诊治。统共患者耐受性高超,只须1-2级不良事件与使用DEX干系,患者出现了MAGE特异性T细胞反应及NK融化活性增高档免疫反应。从第一次给药到疾病进展的时期为30～429天,标明了DEX诊治在晚期非小细胞肺癌患者中安全性高超,何况部分患者可取得疾病的恒久安稳和免疫效应的激活。VIAUD等将从骨髓开头或单核细胞开头的DC功能分泌的DEX勾搭了NKG2D配体和白细胞介素(IL)-15Rα,制备为DEX疫苗,Ⅰ期临床商议骄贵,在大多数玄色素瘤患者中,该DEX疫苗显贵增多了轮回NK细胞数目和NKG2D依赖性功能。

外泌体疫苗的临床商议现在开展较少且仅局限于一些微型的Ⅰ-Ⅱ期商议中,但从各项商议中不错发现外泌体疫苗总体安全可控,有明确增多抗肿瘤免疫的作用,后续跟着生物工程和肿瘤免疫学的显贵逾越,基于外泌体的疫苗诊治单独或与其他已开导的诊治纪律蚁合可能是异日回击癌症的紧迫时期之一。

6 不及及瞻望

外泌体是下一代肿瘤疫苗开发的最好平台之一。以工程化外泌体为基础的肿瘤疫苗正在进行大限度的探索,在环球范围内,一些临床考验进行中,但这一规模的商议存在一些局限性,包括外泌体的异质性、制备复杂、产率低,限制了其临床滚动,以及需要愈加详备的分子机制探索。

总的来说,肿瘤外泌体疫苗的商议为经济且灵验的肿瘤疫苗个体化开发平台指明了一个新的标的,可能成为肿瘤精确医学的里程碑。

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